Análisis proteómico de los productos de excreción-secreción de cuatro aislados de Trichinella spiralis obtenidos de hospederos accidentales / Proteomic analysis of the excretion-secretion products of four Trichinella spiralis isolates obtained from accidental hosts

Resumen: Introducción: Trichinella spiralis es un nemátodo tisular que se aloja en el músculo esquelético de humanos y otros mamíferos y causa una serie de alteraciones fisiológicas. Las proteínas de los productos de excreción-secreción de T. spiralis juegan un papel importante en la aparición y regulación de estas alteraciones. Sin embargo, aún no se conoce el efecto de estos productos en la infección e invasión del parásito al hospedero. Métodos: Mediante un análisis electroforético en una dimensión, Western blot y espectrometría de masas, se evaluaron las diferencias y similitudes entre proteínas antigénicas y de superficie de cuatro aislados de T. spiralis obtenidos de hospederos accidentales (perros) y la cepa de referencia aislada de cerdos (MSUS/MEX/91/CM). Resultados: Utilizando ontología de genes, se encontraron cinco proteínas exclusivas de los hospederos accidentales. Después del análisis, se encontró que estas proteínas forman parte de la matriz extracelular del parásito, cuentan con actividad catalítica y están implicadas en la adhesión a las células del hospedero. La actividad antigénica de las cuatro cepas aisladas de hospederos accidentales es idéntica a la reportada para T. spiralis, visualizándose el triplete antigénico característico de 43, 45 y 47 kDa. Conclusiones: Las proteínas exclusivas de los hospederos accidentales proveen información para entender el mecanismo de acción de este parásito para penetrar el músculo y evadir la respuesta inmune en el hospedero.

Abstract: Background: Trichinella spiralis is an intestinal and tissue nematode specific for mammalian skeletal muscle, causing a series of physiological alterations. T. spiralis excretory-secretion products play an important role in the appearance and regulation of these alterations. However, the effect of these products on the infection and invasion of the parasite to the host is unknown. Methods: Differences and similarities between antigenic proteins and surface proteins of four accidental hosts isolates (dogs) of T. spiralis and the reference strain isolated from pigs (MSUS/MEX/91/CM) were assessed by electrophoresis, western blot and mass spectrometry. Results: Using gene ontology, five proteins exclusive to the accidental hosts were analyzed. The results showed that these proteins are part of the extracellular matrix of the parasite, present catalytic activity, and bind to host cells. The antigenic activity the four strains showed the antigenic triplet characteristic of T. spiralis of 43, 45 and 47 kDa. Conclusions: Five proteins exclusive to dog isolates provided information to understand the mechanism of action of this parasite to penetrate the muscle and evade the immune response in the host.

Transmisión materno-fetal de Trypanosoma cruzi, un problema de salud poco estudiado en México: caso Chiapas / Maternal-fetal transmission of Trypanosoma cruzi, a health problem slightly studied in Mexico: case Chiapas

Resumen: Objetivo: Determinar la prevalencia de infección de Trypanosoma cruzi en 1 125 mujeres embarazadas y la frecuencia con que éstas la transmiten a sus hijos en Tapachula y Palenque, Chiapas. Material y métodos: Se determinó la prevalencia materna por serología, la frecuencia de transmisión por reacción en cadena de la polimerasa (PCR) y la capacidad reactiva a T. cruzi a los 12 meses de edad del niño. Resultados: La prevalencia materna total fue 23/1 125 (2.04%); 9/600 (1.5%) en Tapachula y 14/525 (2.6%) en Palenque. Las mujeres seropositivas tenían entre 20 y 35 años; 31.8% tuvo ruptura prematura de membrana (RPM) y 9.1% tuvo antecedentes de muerte perinatal. La frecuencia de transmisión materno-fetal en Tapachula fue de 2/9(22.2%) y en Palenque de 1/14(7.14%); todos los niños positivos eran asintomáticos. Conclusión: La tasa de transmisión materno-fetal en el estado de Chiapas es variable; la razón podría ser el estado inmunológico de la madre o la cepa de T. cruzi.

Abstract: Objective: To determine the Trypanosoma cruzi infection prevalence in 1125 pregnant women and the transmission frequency to their children from Tapachula and Palenque, Chiapas. Materials and methods: We determined the prevalence by serology tests and the transmission frequency by polymerase chain reaction (PCR) and T. cruzi reactivity capacity after 12 months. Results: Total maternal infection prevalence were 23/1 125 (2.04%), 9/600 (1.5%) were from Tapachula and 14/525 (2.6%) from Palenque. The seropositive women were between 20 and 35 years old, 31.8% have Premature Rapture of Membrane and 9.1% have history of perinatal death. The total percentage of positive newborns by PCR was 9/23 (39.13%), out of those 2/9 (22.2%) are from Tapachula and 7/14 (50%) from Palenque. The Maternal Fetal transmission frequency was. 2/9 (22.2%) in Tapachula and 1/14 (7.14%) in Palenque, all positive infants were asynthomatic. Conclusion: The maternal-fetal transmission rate in Chiapas State is variable; the reason could be the maternal immunological status and T. cruzi strain.

Identificación de Microsporidium spp en pacientes con diagnóstico de leucemia linfoblástica aguda / Identification of Microsporidium spp in patients with acute lymphoblastic leukemia

Introducción. El grupo Microsporidia incluye parásitos intracelulares obligados que afectan varios huéspedes. Los géneros que infectan humanos son Enterocytozoon y Encephalitozoon . Microsporidia es considerado un organismo oportunista en pacientes inmunocomprometidos e inmunocompetentes, que se ha convertido en un importante problema de salud pública. El objetivo del trabajo fue identificar Microsporidium spp en muestras fecales de pacientes con leucemia linfoblástica aguda, en diferente etapa de su tratamiento. Métodos. Se analizaron 77 muestras de niños con diagnóstico de leucemia linfoblástica aguda menores de 12 años, por análisis coproparasitoscópico de Faust. Las muestras se tiñeron con Ziehl Nielsen, tricrómica de Masson y calcoflúor. Finalmente se realizó la amplificación por PCR del gen ribosomal. Resultados. De los pacientes analizados, 16/77 (20.77%) resultaron positivos para Microsporidia, independientemente de que presentaran diarrea. El PCR fue más efectivo para la identificación que el análisis microscópico de las muestras teñidas. Conclusiones. Este trabajo enfatiza la importancia de la microsporidiosis como infección emergente en pacientes con leucemia linfoblástica aguda bajo tratamiento quimioterapéutico, incrementando las complicaciones clínicas adicionales a la leucemia.

Background. The phylum Microsporidia includes obligate intracellular parasites that affect several hosts. The most frequent genera to affect humans are Enterocytozoon and Encephalitozoon. Microsporidium is considered an opportunistic parasite in both immunocompromised and immunocompetent patients and have become an important health problem. The aim of this study was to identify Microsporidium spp in fecal samples of patients with acute lymphoblastic leukemia (ALL), with and without diarrhea, at different treatment stages. Methods. Seventy seven samples from children <12 years old with diagnosis of ALL were analyzed by the Faust coproparasitoscopic method, Ziehl-Nielsen, trichrome and calcofluor staining methods and polymerase chain reaction. Results. Results showed that 16/77 (20.77%) children presented Microsporidium and there was no relationship between microsporidial infection and diarrhea. Polymerase chain reaction was more effective than analysis by light microscopy of staining samples in the identification of the parasite. Conclusions. This work emphasizes the importance of microsporidiosis as an emerging infection in patients with ALL undergoing chemotherapy, increasing the additional clinical complications of leukemia.

Modulación de la actividad patogénica de la toxina TL + de Escherichia coli con una proteína aislada de giardia intestinalis y un péptido sintético / Pathogenic activity modulation of Escherichia coli TL + toxin with an isolated protein of Giardia intestinalis and a synthetic peptide

Se moduló la actividad patogénica de Escherichia coli TL+ (termolábil) y la subunidad A de la toxina de V. cholerae (ADPribosil-transferasa) utilizando fracciones proteicas aisladas de G. intestinalis, así como un péptido sintético, obtenido de la secuencia de la proteína ARF (Factor de ribosilación) de Giardia intestinalis, esta reacción enzimática "in vitro" fue demostrada "in vivo". Material y Métodos: De 1X109 trofozoitos de Giardia intestinalis cepa Portland I se obtuvieron por isoelectroenfoque fracciones proteicas con pH entre 6.5 y 9.5; Se utilizaron diferentes concentraciones de la fracción pH 6.8 para llevar a cabo mezclas de reacción enzimática (ADP ribosiltransferasa) incubándolas con E. coli TL+ cepa H10407. En la reacción "in vivo" se empleo el intestino delgado de conejos machos albinos de la raza Nueva Zelanda formando asas ligadas, en las que se inocularon las mezclas de reacción enzimática antes mencionadas, así como las obtenidas con un heptapéptido sintético (182-190) de la secuencia de la proteína ARF de Giardia con la subunidad A de la toxina de Vibrio cholerae. La actividad de la toxina fue evaluada por la secreción de líquido luminal en las asas y la concentración de AMP cíclico en el tejido. Resultados: Al utilizar diferentes concentraciones de la fracción pH 6.8 se moduló la actividad de ADP ribosiltransferasa de la toxina TL+ de E. coli, considerando la disminución en el volumen de líquido luminal y AMPc en el tejido de las asas. Se observó el mismo resultado con el péptido sintético y la subunidad A de la toxina de V. cholerae. Conclusiones Se hizo evidente la presencia de una proteína ARF (Factor de ADP ribosilación) en la fracción proteica pH 6.8 aislada de G. Intestinalis, así como en el péptido sintético obtenido de la secuencia de la proteína ARF. La especificidad demostrada por la reacción "in vivo" infiere la posibilidad de modular del efecto patogénico de estas toxinas sobre epitelio intestinal abriendo la posibilidad de utilizarse en forma terapéutica.

Diferenciación genética por patrones de restricción entre Entamoeba histolytica monoxénica patógena y no patógena / Genetic differentiation of pathogenic from non-pathogenic Entamoeba histolytica monoxenic by restriction patterns

Las cisteín-proteasas de Entamoeba histolytica son consideradas factores de virulencia importantes en la patogénesis de la amibiasis. Con base en la diferencia que presenta el gene enhhic que codifica para una proteasa de 30 kDa, en este trabajo se validó una estrategia para diferenciar Entamoeba histolytica patógena de la no patógena por medio del patrón de restricción. Material y métodos. Se utilizaron 13 muestras de materia fecal con quistes de Entamoeba histolytica aislados de cuatro individuos asintomáticos y nueve sintomáticos de diferentes edades, sexos y se cultivaron en medio de Robinson. A partir del DNA extraído de los trofozoítos se amplificó el gene enhhic por PCR y se cortó con las enzimas de restricción Taq I y Hinf I. Resultados. De todos los aislados cultivados en medio de Robinson, se obtuvo un fragmento amplificado de 530 pb que hibridó con una sonda para Entamoeba histolytica. Sin embargo la evaluación por digestión enzimática con Taq I y Hinf I indicó que sólo dos de las cuatro muestras que pertenecían a individuos asintomáticos correspondían a poblaciones patógenas de acuerdo al patrón de restricción de la cepa control HM-I:IMSS, las nueve restantes correspondientes a pacientes sintomáticos presentaron un patrón de restricción semejante a la cepa patógena. Conclusiones. Estos resultados muestran que la amplificación del gene enhhic por la reacción en cadena de la polimerasa no es suficiente para establecer un diagnóstico diferencial. Para considerar que una cepa es patógena es necesario realizar digestión enzimática.

Ketoconazol e intraconazol en el tratamiento de queratitis por Acanthamoeba en conejos (modelo experimental) / Ketoconazol and intraconazol in the Acanthamoeba keratitis treatment in rabbits (experimental model)

Se inoculó el estroma corneal de OD en 38 conejos con A. polyphaga, en cultivo axénico con 90 por ciento trofozoitos y 10 por ciento quistes, suspendidos en solución al 1 por ciento de fosfato de dexametasona, con 1.2 x 10 a la sexta/ml células, en 0.1 ml. El OI se uso como testigo. Se formaron tres lotes: Lote A (queratitis) de 14 conejos, con los que se observó el desarrollo de la queratitis con lámpara de hendidura, utilizando la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) y cultivos para A. polyphaga del tejido corneal a los 3, 9, 16, 24 y 37 días. Lote B (Ketoconazol) de 12 conejos; 6 con tratamiento por vía oral, 3 mg/kg dos veces al día y 6 con tratamiento tópico con suspensión al 2 por ciento en hidroxil metil propilcelulosa 4 veces al día. Lote C (itraconazol) de 12 conejos, 6 con tratamiento por vía oral con 1.5 mg/kg dos veces al día, y 6 conejos con tratamiento tópico con suspensión al 1 por ciento en hidroximetil propilcelulosa cuatro veces al día. En los lotes B y C se hicieron enucleaciones en tres conejos de cada vía usada a los 14 y 28 días de tratamiento buscando en el tejido corneal por PCR y por cultivo la presencia de A. polyphaga. En todas las corneas se hicieron cortes teñidos con hematoxilina-eosina para observar datos de inflamación. Resultados: No se observaron datos de inflamación importante en las primeras 96 h por la acción de la dexametasona: este aumentó a partir del cuarto día, y se observó en todos los conejos en diferentes grados, PCR fue positiva en 100 por ciento de lote A; 25 por ciento en el lote B y negativa en el lote C. Los cultivos para A. polyphaga fueron positivos en 42.8 por ciento en el lote A y negativos 100 por ciento en los lotes B y C. Los síntomas de inflamación disminuyen en los primeros 14 días de tratamiento con ketoconazol (lote B) e intraconazol (lote C), y PCR se hace negativa en el lote C desde el día 16

Determinación de la frecuencia de anticuerpos contra Trypanosoma cruzi por la técnica de Eliza y wetern blot en pacientes de un hospital de pediátrico de Villahermosa, Tabasco / Determination of the frequency of antibodies against Trypanosoma cruzi by ELISA and western blot in pediatric patients from a hospital in Villahermosa, Tabasco

La infección por Trypanosoma cruzi en niños del estado de Tabasco ha sido poco estudiada a pesar de ser una zona endémica que presenta un número importante de adultos con enfermedad de Chagas. La ausencia de una sintomatología sugestiva y las condiciones inmunológicas del huésped juegan un papel muy importante para que la enfermedad pase desapercibida o se enmascare al presentarse junto con otra patología. El propósito de este trabajo fue investigar la existencia de riesgos de infección con T. cruzi en una población de niños que acuden a un hospital pediátrico por diferentes padecimientos, y determinar algunas de las limitantes para identificar el comportamiento de la infección. Se determinó la presencia de anticuerpos IgG específicos para T. cruzi en suero mediante las técnicas de ELISA y western blot en 182 niños que acudieron al Hospital "Rodolfo Nieto Padrón" en Villahermosa, Tabasco, sin tener datos clínicos relacionados con la enfermedad de Chagas y con edades de menos de un año a 16 años. De acuerdo con el diagnóstico se les clasificó por entidades nosológicas, zona de localización habitacional y su relación con la presencia de anticuerpos específicos. La frecuencia de anticuerpos fue 9/182 (4.94 por ciento) con un IC a 95 por ciento = 2.4 a 9.4 por ciento. La distribución por sexo y edad esta relacionada con el número de muestras positivas no mostró diferencias; 47.25 por ciento pertenecieron al sexo femenino; de éstos, 5.81 por ciento presentó anticuerpos específicos para T. cruzi positivos fue en las enfermedades oncológicas e infecciosas. La frecuencia de anticuerpos fue mayor al reportado en la población abierta, por lo que deberá ponerse mayor antención a niños que reciben tratamiento inmunosupresor, como en las enfermedades oncológicas infecciosas, en donde se observó la mayor frecuencia de infección

Efecto in vitro de prazicuantel sobre la actividad de Giardia intestinalis / In vitro effects of praziquantel over the trophozoites of Giardia intestinalis

Se realizó un estudio in vitro para conocer el efecto farmacológico de prazicuantel sobre los trofozoítos de Giardia intestinalis cepa P-1. Después de cultivarlos axénicamente, con cinco diferentes concentraciones de prazicuantel (de 0.32 hasta 1.62 nM/mL) durante 24 h a 37ºC, la viabilidad y la CI50 evaluada por la captación de colorante fluorogénico con citometría de flujo mostró un desplazamiento logarítmico de 10º a 10 a la tercera lo que correspondió a una concentración de 1.28 nM/mL. La incorporación de H3 metil-timidina como parámetro de crecimiento celular a 50 por ciento alcanzó 1.20 nM/mL de prazicuantel y el efecto citotóxico calculado por la capacidad de lisar células CHO (células de ovario de hámster chino) marcados con Cr51 se observó para la CI50 en una concentración de 1.05 nM/mL. Con estos tres parámetros se puede inferir qué viabilidad a 50 por ciento se observó a concentraciones más altas de prazicuantel comparadas con la capacidad para dividirse, así como el efecto citolítico, en donde la concentraciones más altas de prazicuantel comparadas con la capacidad para dividirse, así como el efecto citolítico, en donde la concentración de prazicuantel fue la más baja a lo que se atribuye la cualidad de apagar radicales libres, sin embargo, esto no fue proporcional al incrementar la concentración suponiéndose una importante capacidad detoxificante en Giardia. Se concluye que prazicuantel desarrolló actividad farmacológica en protozoarios, lo que le hace susceptible de emplearse contra la giardiasis

La reacción en cadena de la polimerasa una alternativa en niños con problema diagnóstico de giardiasis / Polymerasa chain reaction as an alternative in children with diagnostic problems in giardiasis

Introducción. El empleo de técnicas de biología molecular como la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) en el diagnóstico de la giardiasis intestinal es una alternativa en niños inmunocomprometidos o con dificultad diagnóstica por no presentar la sintomatología habitual. El propósito de este trabajo fue comparar el análisis coproparasitoscópico en serie de 3, con la PCR en las heces de niños asintomáticos. Material y métodos. Se colectaron las heces de 67 niños de 4 a 6 años de edad sin síntomas de giardiasis; con una parte se determinó la presencia de Giardia lamblia, por análisis coproparasitoscópico en serie de 3 y con la restante, se aisló en ADN por el método fenol-cloroformo. Se amplificó el ADN por la PCR empleando como primeros dos oligonucleótidos (+) 5'ACG-ACG-GTA-CTA-AGG-GCA-CGT-G3' y el (-)5'GTA-TCC-TGG-AGC-TCA-CGC-CTT-ACA-TG3'. La amplificación de 520 bp en un gel de agarosa al 1 por ciento que hibridó con la sonda obtenida del ADN de G. lamblia marcada con fluoresceina acoplada a anticuerpos antifluoresceina, se consideró como resultado positivo. Resultados. El análisis coproparasitoscópico fue positivo en 4 (5.97 por ciento) y la PCR en 8 (11.94 por ciento), por cálculo Bayesiano se obtuvo una especificidad del 100 por ciento y sensibilidad del 93 por ciento para la PCR. Conclusiones. La PCR aplicada al diagnóstico de giardiasis en las heces de niños asintomáticos es un método confiable y específico comparativamente con el análisis coproparasitoscópico en serie de 3, por lo que se sugiere emplearla como una alternativa en niños con problemas diagnósticos para esta parasitosis

Aislamiento de Acanthamoeba en lentes de contacto, estuches y soluciones preservadoras de usuarios del Departamento de Lentes de Contacto del Hospital Oftalmológico de Nuestra Señora de la Luz / Acanthamoeba cultures were isolate from 150 samples of contact lenses

Se aislaron diecinueve cepas del género Acanthaoeba, en 150 muestras constituidas por 65 lentes de contacto; seis se aislaron de 49 lentes hidrofílicos y dos de 16 lentes semirrígidos correspondiendo al 12.33 por ciento global de positividad. De las 75 soluciones preservadoras se aislaron diez cepas de Acanthamoeba; el mayor número de muestras positivas se observó con la solución de timerosal al 1 por ciento(7/30) y el menor con EDTA al 1 por ciento (1/15) e hidrogéno peroxidasa (2/15). El global de los aislamientos en soluciones correspondió al 13.33 por ciento. Sólo se encontró una cepa de Acanthamoeba en los estuches para lentes de contacto; la mayor parte de los aislamientos podrían corresponder a una amiba patógena, Acanthamoeba castellani, aunque para su clasificación se requiere de estudios complementarios con patrón isoenzimático y estudio al microscopio electrónico.

Alteraciones de la mucosa intestinal en la giardiasis experimental / Changes of the intestinal mucosa in experimental giardiasis

A ratas machos Long Evans, de 21 días de edad y peso promedio de 40 g se les administraron -mediante sonda gástrica- quistes de Giardia lamblia procedentes de diez pacientes pediátricos con sintomatología digestiva. Un grupo testigo no se inoculó. Después de 15 días (postinoculación) los animales presentaron disminución de peso; al relacionarlo con el periodo postinoculación, los valores de la pendiente fueron de m= 2.83 a 7.48 con un coeficiente de correlación de Persona entre 0.79 a 0.99. En 60 por ciento de los animales las alteraciones de la mucosa intestinal fueron del grado III de Rubi, con actividad enzimática de lactasa entre 2.235 ñ 0.875 y 3.533 ñ 1.107 U/g de proteína. El resto de los animales presentaron alteraciones del grado I y II de Rubi con actividad de lactasa más alta, aunque no llegaron a los valores del grupo control; la respuesta inmune humoral tambén se vio dividida en la misam proporción. De este estudio podemos concluir que encontramos diferencias antigénicas y de patogenicidad entre los aislados de Giardia lamblia, provenientes de pacientes sintomáticos, lo que nos podría explicar el diferente comportamiento del parásito frente al huésped e inclusive la falta de sintomatología que en ocasiones presenta

Nuevos conceptos sobre amibiasis / New concepts on amoebiasis

Las parasitosis intestinales por protozoarios que producen diarreas se dividen en tres grupos etiológicos: las ocasionadas por giardia lamblia, entamoeba histolytica y criptosporidium SP. En relación a entamoeba histolityca se estimó en 1981, que 480 millones de individuos portaron el parásito basándose en la presencia de anticuerpos específicos. Más aún, se ha calculado que anualmente se infectan 48 millones de individuos, haciendo de esta parasitosis un problema de salud pública importante. Por otra parte, y como respuesta a la situación mencionada, se han descrito determinadas características en las cepas de Entamoeba histolytica que las hacen potencialmente invarosas: capacidad para fagocitar, mayor facilidad para aglutinar a la concabalina; falta de carga superficial que facilita la interacción con las células intestinales, efecto citopático más potente in vitro, habilidad para crecer en medio sólido, capacidad para producir lesiones en animales experimentales y específico patrón isoenzímatico, este última ha sido considerado como un patrón de virulencia por varios investigadores